En que consiste el metodo de cromatografia

Cromatografía en pilar es una de las técnicas qué es más útiles hacia purificar compuestos. Esta técnica usar una paso estacionaria, los se embala dentro de una columna, y una fase móvil que pasa a través de la columna. ~ ~ técnica aprovecha ns diferencias después polaridad entre compuestos, dejando que las moléculas suelen estar separado. 1 las dos fases estacionarias más comunes para cromatografía en pilar son gel del sílice (SiO2) y alúmina (Al2O3), con además común utiliza escenario móviles existencia solventes orgánicos. 2 el solvent(s) hacia la paso móvil dependen de la polaridad de las moléculas de ser purificada. Hasta luego compuestos polares exigir típicamente más disolventes polares alcanzan el disolver de facilitar ns paso de las moléculas mediante la escenario estacionaria. Una vez finalizado los proceso después purificación de solvente puede eliminarse de las fracciones recogidas utilizando ns evaporador rotatorio hacia producir el material aislado.

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Principles


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La mezcla ese muestra se coloca en la departamento superior después la pilar y absorbida en la parte superior de la escenario estacionaria. Posteriormente, la paso móvil se aplica a la columna y utilizada a terminar de eluir la mezcla por medio de la escenario estacionaria. Cromatografía de calor explota la polaridad después la molécula para separar los compuestos. La diferencia del polaridad conduce un variaciones dentro la tasa dentro la como las moléculas viajan mediante la columna, ese separa eficazmente los compuestos entre sí. La escenario móvil se recoge en pequeñas fracciones dentro de tubos del ensayo qué elutes después la columna, permitiendo los aislamiento y purificación después los compuestos. Por último, ns disolvente se elimina utilizando uno evaporador rotatorio ns la aislada, establecidos.

Versatilidad y comodidad de la cromatografía de calor ha realmente una de las técnicas hasta luego ampliamente utilizadas a ~ purificar compuestos. A diferencia después la recristalización (otro había utilizado técnica de purificación) compuesto purificados alcanzan cromatografía ese columna alguno debe oveja sólida. Cromatografía de calor también es quizás de aislar un un metula de enlace de laa mezcla. Otra del las ventajas ese la cromatografía de columna es que muy poco se conoce para de las originar físicas del construir para logro utilizar esta método del purificación, que es técnica lo hace muy recibir al síntesis o aislar enlace novedosos, dentro de la que poco se sabe acerca los establecidos.

Solvente

La valuación a la cual un componer atraviesa por medio de la calor depende ese la paso móvil se utiliza. Por lo general, el qué es más polar el solvente además rápido los compuestos pasará a través de la columna. Solvente polares tienen la a mayor afinidad por la paso sólida, limitando las interacciones entre der establecidos y la escenario sólida, permitiendo que los compuesto a acabado de eluir qué es más rápidamente. Debe tenerse cuidado seguro que ns sistema solvente elegido para la cromatografía de calor tiene la polaridad suficiente para crear separación entre los compuestos en la mezcla. La elección de disolvente es cardenal para la exitosamente separación por medio de cromatografía dentro de columna. Para definida un óptimo sistema de solvente, se derecha realizar una serie de experimentos de cabo delgada cromatografía (TLC) previamente realizar el experimento ese la cromatografía del columna. En algo casos puede oveja necesario utilizar un sistema de sistema binario ese solvente.

Selección de un sistema del solventes

Identificar un sistema de solventes que produce un factor de retardo (Rf no ) entre 0,2 – 0,3 para ns compuesto deseado en una placa ese TLC.Empezar alcanzan acetato de etilo o diclorometano como fase quaterback para los experimento después TLC.Si la Rf es mayor que 0.3, probar alcanzan menos disolvente polar, como hexano. Sí la Rf es menor los 0.2, intenta añadir una pequeña cantidad de ns disolvente polar como el metanol.El sistemáticos solvente óptimo pueden requerir la a mezcla del dos solventes.Ser atención de cuales usar qué es más del 10% metanol qué fase móvil para una calor de sílice.
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1. Mezcla ese Gel del silicona de

Verter los gel ese sílice dentro un matraz Erlenmeyer. Los peso del cosas de embalaje debe cantidad de aproximadamente cincuenta x del la muestra están separada. Sí los compuesto se separaron sí valores muy similares del Rf , quizás requerir influencia una mayor cantidad de sílice vía muestra, que denominada el situación de este ejemplo.Lugar 10 g ese sílice dentro el matraz ese Erlenmeyer, ya que cincuenta mg del la me muestro (45 mg de Fluorenona y cinco mg del tetraphenylporphyrin) eso es correcto siendo aislados.Añadir el sistema ese solventes (hexano/diclorometano, 70%: 30%) dentro de el erlenmeyer que contiene el gel del sílice. Agregue apropiado solvente para definitivamente de los todo ns gel del sílice es está bien solvatados. La silicona cuales se disolverá, todavía la mezcla sería visualmente perceptible cuándo solvatados. Laa vez los se ha agregar el disolvente agitar los matraz Erlenmeyer para garantizado de los la sílice es bien solvatados.

2. Preparación ese la columna

Seleccione la columna de dimensiones adecuado. Por lo visión de conjunto la columna se debiera ser llenar a límite camino alcanzan mezcla del gel después silicona. Cuánto mayor está dentro la muestra oveja purificado, el más grande la pilar necesaria.Conecte la parte inferior de la columna con un trozo ese lana del vidrio. Alcanzan una varilla larga, definitivamente de los la lana se encontrar firmemente dentro de la divisiones inferior después la columna ajustamiento por sobre de la llave de paso.Una vez ese la lana esté firmemente dentro su lugar, solicitar una fina promontorio de arena encima la lana del vidrio.Nota: sí señor la calor está equipada alcanzar una frita del vidrio acerca de la llave después paso, debe omitirse esta paso.Abrazadera ese la columna en posición vertical dentro de un soporte después anillo.Suavemente utilizando un embudo, vierta la mezcla preparada del gel ese sílice dentro la columna. Quizás que necesitar añadir además disolvente hacía transferir la mezcla de matraz Erlenmeyer a la columna. Usando la a pipeta, lave cuales gel después silicona ese se adhiere a los lados de la columna.Como los gel del sílice es localización en la columna, leve suavemente los lados del la pilar para que el gel de sílice firmemente ese paquetes y excluye cualquier globo de aire.Abrir la llave del paso y deje ese solvente drene dentro de un erlenmeyer claro hasta ajustar antes después gel ese sílice y ns solvente se restablecen a los predeterminados frente. El gel del silicona nunca tengo que ir seco hasta que se complete el procedimiento.Coloque una promontorio delgada después arena en la parte superior ese gel después sílice (figura 1). Usando una pipeta, lave cualquier arena que puede hacer haber pegado a der lados del la columna.Drenar cualquier solvente adicional hasta ese la arena está seca, pero cuales hasta la capa de gel ese silicona.

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Figura 1. La configuración adecuado para una cromatografía en columna el experimento anterior la adición de la muestra.

3. Añadir la show a la columna

Disolver la muestra dentro de la menor cantidad de solvente (con los mismo disolvente ese se usó para hacer la mezcla ese gel de sílice).Suavemente alcanzan una pipeta, agregar la show a la departamento superior de la columna.Una vez que la exhibida se ha aplicado un la parte superior después la columna, abra la llave ese paso y deje que los solvente drene a través de la promontorio de arena, pero cuales la capa de gel ese silicona. Use laa pequeña cantidad de solvente a ~ lavar abajo cualquier muestra que puede de se aferró a der lados después la columna. Este solvente adicional a través de la cabo de la arena de este modo como de drenaje.

4. Liberador de la muestra por medio de la columna

Muy suavemente alcanzan una pipeta, añadir 4 – cinco mL ese disolvente de tal manera que no moleste ns la capa de arena.Colocar uno embudo dentro la parte superior después la pilar y muy lentamente y suavemente llene los resto después la columna alcanzar el disolvente.Abrir la llave después paso y deje que el solvente drene a través de la columna.Comenzar uno colectar la escenario móvil como drena del la columna de tubos después ensayo.Tubos después ensayo ellos deberían colocarse en un bastidor de tubo de ensayo dentro una manera secuencial.Agregar qué es más solvente un la divisiones superior de la pilar como ~ ~ necesario asciende que todos los compuesto deseados ellos tienen eluida ese la columna.

5. Recuperación del los componentes

Si los enlace son coloreados, entonces puede ser ~ ser visualmente identificados. No tener embargo, si los enlace son incoloros, tendrán ese identificarse mediante luz ulta-visible (UV) (si los compuestos contienen verbal) o con la tinción apropiada. La pureza de los compuestos puede ser verificada a través de cromatografía en cabo fina.Identificar ese tubos después ensayo los contienen, establecidos de la deseada.Combinar todas ns fracciones que están incluidos el buscado aislado, establecidos dentro de un matraz antes de tarado del (RB) después fondo redondo. Cometer esto hacía cada componer se aisló.Evaporar ns solvente colocando los frasco ese RB dentro el rotavapor.Una vez que se ha elección todo el disolvente, pesan el RB alcanzar el producto delgada y restar los peso inicial ese RB para logrado un rendimiento.

Cromatografía en columna es uno método de purificación versátil los se usar para distanciar los compuestos en la a solución. Una mezcla de solución denominaciones llevada vía un disolvente mediante una columna que contener un adsorbente sólido, ~ la fase estacionaria. La mezcla ese solvente y la me muestro se contar la fase móvil.

Moléculas dentro la paso móvil viajan mediante la pilar a diferentes ritmos, residencia en en sus originar químicas y su afinidad de la fase estacionaria. Así, cada uno de ellos de ellos sale la columna al unísono diferentes. Laa vez ese los compuesto han sido apartado y purificados pueden ser procesados o es así listos a ~ su distribución. Esta video sería introducir der fundamentos del la cromatografía ese columna, luego Mostrar la técnica alcanzan la purificación de enlace orgánicos.


En cromatografía en columna, las moléculas de absorben reversible a la paso estacionaria como fluyen a través de la columna, de semejante modo retardando su progreso. Enlace que interaccionan débilmente alcanzar la escenario estacionaria son más rápidos salir de la columna, o eluir. Compuesto que interactúan fuertemente con la fase estacionaria son más lentos a terminar de eluir. La fase estacionaria denominaciones un adsorbente dentro de polvo o gel qué gel después sílice o alúmina. Gel del sílice y alúmina son altamente polares vía lo que interactúan fuertemente con disolventes y compuestos polares y débilmente alcanzan las moléculas no polares. La fase estacionaria es cargada un la columna como la a mezcla alcanzan el solvente y luego denominaciones embalada por los flujo solvente a través de la fase estacionaria. Cuando está correctamente embalado, la paso estacionaria denominaciones homogénea de arriba a abajo y no tener burbujas del aire o parches secos, qué flujo rara vez, a menudo, rara vez causado por están irregularidades interfiere con la separación ese compuestos. Ns disolvente o eluyente, es bajo un disolvente orgánico ese un embalse. Dentro general, solventes alguna polares solo elución ese compuestos alguna polares, mientras tanto que ese solventes polares elución compuesto polares y cuales polares. Si una mezcla contiene compuestos de polaridad considerable diferentes, pueden utilizarse la a serie de solventes polares cada vez hasta luego a disolver de eluir todos los compuestos de interés. La tasa ese flujo después fase móvil eliminar generalmente controlada por laa válvula de concluir en la divisiones inferior de la columna. Pausas dentro el fluir se mantienen al mínimo para evitar la difusión ese los compuestos. La paso móvil, dejando la columna, los efluente se recoge dentro de fracciones para preservar la separación de compuestos. Actualmente que usted entiende los comienzo de la cromatografía dentro de columna, vamos ns ir a través de un procedimiento hacía la purificación después una mezcladas de enlace orgánicos.


Para empezar el procedimiento, obtener el equipo qué se indica en el texto. Pesado un matraz después fondo redondo para cada componer para aislarse y registrar la masa. Ns continuación, pesan la muestra y disolver en los mínimo volumen ese disolvente necesitada. Los disolvente apropiado debe predeterminado usando cromatografía en promontorio fina. El valor de Rf tengo que estar entre 0.2-0.3. Luego, determinación la al gusto de gel después sílice necesaria hacía la escenario estacionaria, basada en el peso seco de la muestra y la diferencia dentro la distancia después migración ese los compuestos de interés residencia en en la proyección previa de TLC. Vierta la cantidad suficiente de gel ese sílice dentro un matraz Erlenmeyer. Adición el solvente al gel después silicona hasta que la mezcla denominaciones translúcida y se mueve libremente cuándo se remolina el frasco. A continuación, seleccionado una pilar lo suficientemente amplio como hacia que los gel del sílice se llenará asciende la mitad. Si la columna alguna tiene la a frita de vidrio, lugar lana ese vidrio en la pilar y presione firmemente hacia bajo con una varilla larga. Cobertura la lana del vidrio alcanzan unos dos cm de arena hacia impedir la caminando por la lana después vidrio de sílice. Dentro una campana extractora abrazadera de la calor a ns soporte ese anillo, jubilación espacio suficiente para alojar los tubos del ensayo.

Colocar a embudo en la pilar y garantizado que la llave de paso esté cerrada. Vierta la mezcla dentro la columna, golpeando suavemente der lados como la mezcla se instala para desactivar las burbujas del aire. Enjuagar ns embudo, matraz y ns paredes ese la columna alcanzan el disolvente hacía transferir todo el gel dentro de la columna.

Coloque un matraz Erlenmeyer debajo ese la columna. Abrir la llave después paso permite ns solvente drenar en el matraz trepar que el nivel ese disolvente es justo acerca el gel de sílice y luego concluir la llave después paso. Verter unos dos cm después arena para el gel. Enjuagar suavemente cualquier arena pegada a ese lados ese la columna con el disolvente. Drene ns disolvente conforme sea esenciales para que la arena es sobre todo seco, todavía sigue regalo la silicona completo cubierto.


Para empezar la separación, añada la exhibida a la pilar sin incordiar a la arena. Utilizar poco porciones del disolvente a ~ enjuagar cualquier muestra adhiriéndose a los paredes de la calor y enjuagar ns recipiente de la muestra. Alcanzan cuidado drene el disolvente elevándose que el nivel justo para de la silicona. Luego, alcanzan una pipeta, agregar suavemente cuatro – cinco mL ese disolvente sin alterar la cabo de arena. Localización un embudo en la columna y llene lentamente alcanzar el solvente. Retirar el matraz y reemplácelo alcanzan un tubo del ensayo rotulado. Con el primer tubo en su lugar, abra la llave después paso y recoger ns eluído trepar que el tubo está casi lleno.

Continuar recogiendo fracciones asciende que se eluyen todos los compuestos deseados, proceder secuencialmente mediante los tubos de ensayo etiquetados. Si haya terminado, concluir la llave ese paso.


Para cada construir aislado, combinar las fracciones puras dentro un matraz ese fondo redondo anterior pesado. Eliminar los solvente del frasco dentro un evaporador rotatorio y más tarde pesar el matraz de fondo redondo que almacenamiento el compuesto seco. Hacía obtener además información, vea el vídeo de la compilación en evaporación rotatoria.

Esta muestra contiene una mezcla después tetraphenylporphyrin, o TPP y Fluorenona. Los TPP rojo púrpura oscuro eluyó dentro primer lugar, seguido por ns amarillo Fluorenona. La pureza de cada compuesto apartado fue me confirmé por espectroscopia del RMN.


Cromatografía en pilar se utiliza en la purificación y analizar en la a variedad de los campos científicos.

Cromatografía líquida de elevado rendimiento, o HPLC, es una forma de cromatografía en calor que proporciona eminente separación entre compuestos y pueden incorporar detectores especializados qué un detector ese radiación radiactiva moléculas. Usando HPLC, ns fosfolípido radiactivo quizás fácilmente aislado de la a mezcla de muchos otros aunque lo consiste en un bajo porcentaje de la mezcla. ~ ~ información puede ayudando a desocupar la producción, especificado y funciones después muchas biomoléculas importantes.

La cromatografía flash denominada una variante de la cromatografía en calor en la que la paso móvil se mueve por medio de la columna abajo la presión ese aire o gas dentro de lugar del flujo por gravitación solamente.

Esto crea un flujo qué es más rápido, minimiza la difusión a ~ una formación de hielo separación. Ns compuesto querer se recoge dentro unas fracciones puros, concentrados, como se muestra alcanzan cromatografía en cabo fina, resultando en pureza y excelente rendimiento de la purificación.

El instrumento de calor generalmente no es adecuada para la separación del pequeños volúmenes, pero parte mezclas no son compatibles alcanzar técnicas especializadas qué la HPLC. Purificación dentro de pequeña escala se realiza con columnas después pipeta del vidrio, alcanzan un bulbo ese pipeta usado a ~ cromatografía flash dentro pequeña escala. Esto eliminar particularmente útil al integrado una me muestro para ns técnicas después purificación especialidad o como paso final ese de la purificación a gran escala.

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Sólo ha vio la introducción del Zeus para cromatografía dentro de columna. Por ahora debe ser familiarizado con los comienzos de la cromatografía después columna, a procedimiento para la cromatografía de pilar de gel del silicona y algunas aplicaciones del la técnica.

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La me muestro que contiene una mezcla después tetraphenylporphyrin (ATP, 5 mg) y Fluorenona (45 mg) se ha separado alcanzan éxito y cada construir ha ser aislado. Ns TPP primeramente eluida ese la pilar como una banda de púrpura-rojizo oscurezca y la Fluorenona posteriormente eluida después la calor como una banda amarillo ()figura 2). Las fracciones eluídas se recolectaron dentro de tubos ese ensayo e identificaron vía sus colores presentado (figura 3). Los fracciones que están incluidos los compuestos aislados se fusionaron dentro RBs separados y los disolvente se eliminó usando un evaporador rotatorio a ~ producir ATP elevado puro y Fluorenona. La pureza del los enlace chromatographed se validó vía la espectroscopia ese resonancia magnética átomo (RMN). Enlace se acudir además verificar punto de fusión, pero solamente si los punto del fusión para ns deseado, establecidos se ha ciertamente previamente.

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Figura 2. Como los compuesto de recorrer mediante la paso estacionaria empezar a separar. En esta experimento ns TPP (banda del púrpura-rojizo oscuro) viaja mediante la calor un poco además rápido ese la Fluorenona (banda amarilla).

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Figura 3. Los compuesto responsables ese la calor se recogen en tubos ese ensayo. Los enlace se separan dentro de este experimento estaban coloreados, vía lo que pueden ser identificar visualmente.


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Resumen

Cromatografía en pilar es ns método prácticamente y versátil hacía purificar compuestos. Esta método separa compuestos famoso en polaridad. Explotando los diferencias dentro de la polaridad después las moléculas, cromatografía de pilar suelen puede distanciar compuestos de la proporción a la como los compuesto recorrer por medio de la escenario estacionaria después la columna. Una ese las ventajas después la cromatografía en pilar (especialmente en comparación alcanzan recristalización) es contar muy poco encima de los compuesto deben oveja conocidos antes de del proceso ese purificación. La otra favorables al uso de cromatografía en calor es que pueden utilizarse para purificar sólidos y aceites, entretanto que la recristalización puede hacer utilizarse hacia purificar sólidos. Ser técnica pueden utilizarse ~ para aislar ns varios compuesto de una mezcla.

Aplicaciones

Cromatografía en columna es uno del los métodos qué es más convenientes y utilizados hacía purificar compuestos. Alcanzan frecuencia, reacciones sintéticas producen mucho productos y cromatografía de columna puede utilizarse hacía aislar cada uno de los enlace para la examinación adicional. Cromatografía de columna es sumamente valioso cuando sintetizando o aislar enlace novedosos, son de muy poco debiera ser conocerse encima de un componer y su " propiedades físicas antes del proceso después purificación.

La industrial​ farmacéutica utiliza rutinariamente cromatografía en pilar para purificar compuestos qué parte de su proceso después desarrollo ese drogas de etapa temprana. Tres a menudo dentro de los investigadores después estas estadios preliminares se construir bibliotecas del compuestos rodeando de un compuesto de plomo y posteriormente utilizar la cromatografía en calor para purificar los compuestos recientemente sintetizados. 4 el uso y la versatilidad del esta técnica del purificación ha conducir a a educadores ns incorporar la técnica en el plan de estudios del pregrado. 5,6


References

Mayo, D. W.; Pike, R. M.; Forbes, D. C., Microscale organic laboratory : with multistep y multiscale syntheses. Fifth ed.; J. Wiley & Sons: Hoboken, NJ; p xxi, seiscientos ochenta y uno p (2011).Armarego, W. L. F.; Chai, C. L. L., Purification of laboratory chemicals. 5th ed.; Butterworth-Heinemann: Amsterdam; Boston; p xv, seiscientos nueve p (2003).Silverman, R. B.; Holladay, M. W., The necessary chemistry of medicine design y drug action. Third edition / ed.; Elsevier/AP, scholastic Press, is an imprint that Elsevier: Amsterdam ; Boston; p xviii, 517 pages (2014).Mortensen, D. S.; Perrin-Ninkovic, S. M.; Shevlin, G.; Elsner, J.; Zhao, J.; Whitefield, B. et. Al. Optimization of a series of Triazole include Mammalian Target the Rapamycin (mTOR) Kinase Inhibitors and the exploration of CC-115. Journal of medicinal Chemistry (2015).Davies, D. R.; Johnson, T. M., Isolation of numero 3 Components desde Spearmint Oil: An practice in Column and Thin-Layer Chromatography. Journal of chemistry Education,84 (2), trescientos dieciocho (2007).Taber, D. F.; Hoerrner, R. S., obelisk chromatography: Isolation that caffeine. Journal of chemistry Education, 68 (1), 73 (1991).

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Cromatografía en calor es un método del purificación versátil que se utiliza para distanciar los compuestos en una solución. Laa mezcla después solución es llevada de un disolvente a través de una columna que contiene un adsorbente sólido, llamado la escenario estacionaria. La mezcla ese solvente y la show se contar la paso móvil.

Moléculas en la fase móvil viajan mediante la columna a diferentes ritmos, residencia en en sus originar químicas y su afinidad de la paso estacionaria. Así, cada uno de ella sale la columna a la vez diferentes. La a vez los los compuesto han sido estar separado y purificados quizás ser procesados o eso es correcto listos a ~ su distribución. Este video sería introducir ese fundamentos ese la cromatografía después columna, después Mostrar la técnica con la purificación de compuesto orgánicos.

En cromatografía dentro columna, las moléculas de tasa de absorción reversible a la paso estacionaria como fluyen por medio de la columna, de tal modo retardando su progreso. Compuestos que interaccionan débilmente alcanzar la escenario estacionaria son más rápidos salir del la columna, o eluir. Compuestos que interactúan fuertemente alcanzan la escenario estacionaria son además lentos a disolver de eluir. La escenario estacionaria denominaciones un adsorbente dentro polvo o gel como gel del sílice o alúmina. Gel después sílice y alúmina son muy polares vía lo que interactúan fuertemente alcanzar disolventes y compuestos polares y débilmente alcanzar las moléculas cuales polares. La paso estacionaria denominada cargada un la pilar como laa mezcla alcanzan el solvente y luego denominaciones embalada por el flujo solvente por medio de la paso estacionaria. Cuando está exactamente embalado, la fase estacionaria eliminar homogénea de encima a debajo y no tener burbujas ese aire o parches secos, qué flujo rara vez, a menudo, rara vez causado por estas irregularidades interfiere alcanzar la separación de compuestos. Ns disolvente o eluyente, es comúnmente un disolvente orgánico después un embalse. En general, solventes no polares sólo elución los compuestos no polares, mientras que los solventes polares elución compuesto polares y no polares. Si laa mezcla contiene compuestos de polaridad significativo diferentes, puede utilizarse la a serie del solventes polares cada vez más a terminar de eluir todo el mundo los compuesto de interés. La tasa después flujo ese fase móvil denominada generalmente controlada por una válvula de cierre la puerta en la departamento inferior de la columna. Pausas dentro el fluir se mantienen al mínimo para bloqueador la difusión después los compuestos. La escenario móvil, dejar la columna, el efluente se recoge dentro fracciones para preservar la separación después compuestos. Actualmente que usted comprende los comienzos de la cromatografía dentro de columna, vamos uno ir por medio de un procedimiento hacía la purificación después una mezcla de compuestos orgánicos.

Para comienzo el procedimiento, logrado el equipo como se indica dentro de el texto. Pesan un matraz del fondo redondo hacia cada compuesto para aislarse y registrar la masa. A continuación, pesar la muestra y disolver en los mínimo volumen del disolvente necesitada. Ns disolvente adecuado debe predeterminado usando cromatografía en cabo fina. El valor del Rf derecha estar adelante 0.2-0.3. Luego, determina la cantidad de gel de sílice necesaria para la paso estacionaria, famoso en ns peso seco después la muestra y la diferencia en la distancia ese migración ese los enlace de interés basándose en la adivinar previa de TLC. Vierta la cantidad adecuada de gel del sílice dentro un matraz Erlenmeyer. Adición el solvente al gel después silicona hasta que la mezcla denominaciones translúcida y se moverse libremente cuando se remolina ns frasco. Ns continuación, electo una columna lo suficientemente amplio como hacía que ns gel del sílice se llenará trepar la mitad. Correcto la columna alguno tiene una frita del vidrio, colocar lana del vidrio en la pilar y presione firmemente hacia debajo con la a varilla larga. Cobertura la lana del vidrio con unos 2 cm ese arena a ~ impedir la seguir por la lana de vidrio después sílice. En una campana extractora abrazadera después la columna a uno soporte de anillo, dejar espacio adecuada para alojar der tubos de ensayo.

Colocar uno embudo dentro la calor y asegurar que la llave del paso esta cerrada. Vierta la mezcla en la columna, golpeando suavemente der lados como la mezcladas se instala para excluir las burbujas de aire. Enjuagar el embudo, matraz y las paredes después la columna alcanzar el disolvente hacía transferir todo ns gel en la columna.

Coloque a matraz Erlenmeyer debajo después la columna. Abierto la llave ese paso permite ns solvente drenar dentro de el matraz trepar que ns nivel de disolvente denominada justo acerca el gel de sílice y luego cierre la llave de paso. Verter unos 2 cm ese arena acerca el gel. Enjuagar suavemente alguna arena pegada a der lados del la columna alcanzan el disolvente. Drene ns disolvente según sea esenciales para que la arena es encima todo seco, todavía sigue existencia la silicona completa cubierto.

Para iniciar la separación, añada la show a la columna sin molestar a la arena. Utilizar poco porciones después disolvente para enjuagar no muestra adhiriéndose a ns paredes ese la pilar y enjuagar ns recipiente ese la muestra. Alcanzan cuidado drene ns disolvente hasta que los nivel justo acerca de la silicona. Luego, alcanzar una pipeta, añadir suavemente cuatro – cinco mL de disolvente sin alterar la cabo de arena. Localización un embudo en la calor y llene lentamente con el solvente. Retirar ns matraz y reemplácelo alcanzar un tubo de ensayo rotulado. Con el primer tubo dentro su lugar, abra la llave del paso y recoger ns eluído trepar que los tubo está casi lleno.

Continuar recogiendo fracciones hasta que se eluyen todos los compuestos deseados, proceder secuencialmente mediante los tubos ese ensayo etiquetados. Cuando haya terminado, cierre la puerta la llave ese paso.

Para cada compuesto aislado, asocia las fracciones puras dentro de un matraz ese fondo redondo previamente pesado. Eliminar el solvente del frasco dentro un evaporador rotatorio y más tarde pesar los matraz de fondo redondo que comprender el componer seco. Hacía obtener más información, vea el vídeo después la compilación en evaporación rotatoria.

Esta muestra comprender una mezcla de tetraphenylporphyrin, o TPP y Fluorenona. Los TPP rojo púrpura dólares eluyó dentro de primer lugar, seguido por ns amarillo Fluorenona. La pureza ese cada compuesto apartado fue me confirmé por espectroscopia después RMN.

Cromatografía en pilar se utiliza dentro la purificación y analizar en laa variedad de los campos científicos.

Cromatografía líquida de elevado rendimiento, o HPLC, denominaciones una forma después cromatografía en columna que proporciona distinguido separación entre compuestos y quizás incorporar detectores especializados como un detector del radiación radiactiva moléculas. Usando HPLC, uno fosfolípido radiactivo puede hacer fácilmente apartado de la a mezcla del muchos otros sin embargo lo por lo tanto es un bajas porcentaje ese la mezcla. Es información puede ayudar a aclarar la producción, especificado y funciones después muchas biomoléculas importantes.

La cromatografía flash denominada una variante ese la cromatografía en calor en la los la fase móvil se mueve a través de la columna bajo la presión de aire o gas dentro de lugar después flujo por gravedad solamente.

Esto creando un flujo qué es más rápido, minimiza la difusión hacía una consta separación. Los compuesto buscado se recoge en unas fracciones puros, concentrados, qué se muestra alcanzan cromatografía en promontorio fina, resultando dentro de pureza y excelente actuación de la purificación.

El dispositivo de columna generalmente no es apropiado para la separación de pequeños volúmenes, pero algunos mezclas no son compatibles alcanzan técnicas especializadas qué la HPLC. Purificación dentro pequeña escala se realiza con columnas después pipeta después vidrio, alcanzan un bulbo ese pipeta usado para cromatografía flash en pequeña escala. Esto es particularmente sensato al preparar una me muestro para ns técnicas del purificación especialidad o qué paso final de de la purificación a estupendo escala.

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Sólo ha visto la introducción de Zeus para cromatografía dentro de columna. Por ahora debe estar familiarizado con los empezar de la cromatografía después columna, ns procedimiento hacía la cromatografía de pilar de gel del silicona y algunas aplicaciones después la técnica.